Vag³Gel（子宮頸部・膣粘液）

A子宮頸部・膣試料の採取と処理約 75 分

1. ドナーが月経カップを 60 分間使用する。回収後、滅菌済み 50 mL チューブに移す。
2. カップごと 8,000 × g で 15 分間遠心分離して分泌物を回収し、カップを廃棄する。
3. 回収した試料を滅菌フラスコ内で最大 100 mL の滅菌 MRS 培地に再懸濁する。
4. フラスコを優しく何度か転倒させ、ピペッティングして均質化する。

Note 月経カップは必ずグローブを着用して取り扱い、事前に 70% エタノールで拭くこと。

Critical 試料はできるだけ新鮮なものを使用し、理想的には採取後 30 分以内に処理を開始し、氷上で保持する。ゲルが MRS 中で製造されている場合は 0.9%（w/v）NaCl で再懸濁する。未使用の試料はグリセロール（最終 10% v/v）を加えて −80 °C で保存できる。

BVag³Gel での培養約 5 分

1. シリンジのキャップを外して滅菌状態で保管し、プランジャーを軽く押して最初の 2～3 滴を廃棄する。
2. 二重シリンジ混合法を用いて、接種源とゲルを体積比 1:1 で 6～7 回往復させて混合する。
3. 接種源とゲルを含むシリンジにキャップを戻す。
4. 実験デザインに応じて、37 °C で好気条件下、最大 72 時間培養する。

Note 分子の影響を評価する場合は、二重シリンジ法で添加する前にゲル内で 37 °C、24 時間培養して安定化させる。

Critical 培養前の嫌気条件は必須ではないが、絶対嫌気性菌の損失を防ぐことができる。

Cゲルの溶解1 シリンジあたり約 5 分

1. 各試料に Bac³Gel 溶解培地（200 mM クエン酸ナトリウム）を体積比 1:1 で加える。
2. ゲルが完全に溶解するまで十分に混合する。均質化した試料は下流解析に使用できる。

D単一株を用いる場合約 15 分

1. 対象微生物（例：Lactobacillus）を適切な培地で対数増殖期まで培養する。
2. 遠心分離して細胞を沈降させ、上清を除去して適切な培養培地で再懸濁する。
3. 600 nm における光学密度を測定し、必要に応じて細胞濃度を調整する。
4. 手順 B、続いて C に進む。

Critical ゲルが MRS 中で製造されている場合は、細胞ペレットを MRS ではなく 0.9%（w/v）NaCl で再懸濁すること。