Technical bulletin
Gut³Beads（ガットスリービーズ）
ムチンビーズを浮遊培養に添加し、難培養性の腸内微生物の菌体量と生存率を高めるためのプロトコル。
Anatomical site
Intestinal
10 mL フラスコ
Product
本キットは、難培養性微生物の培養を改善するために設計されている。Gut³Beads は菌体量と微生物の生存率を高める添加剤であり、プロバイオティクスや生きたバイオ治療薬の製造に役立つ。
本プロトコルでは、浮遊微生物培養に Gut³Beads を添加する方法、および下流解析のための試料調製手順を記載する。
Before you begin
- 以下の手順は、実験室スケールの回分式発酵における単一株の浮遊培養について記載している。Gut³Beads は制御されたバイオリアクターやその他の動的培養系にも使用されている。
- 本キットのビーズは直径 4.5～6.0 mm である。組成は調整可能であり、カスタム組成も提供している。
- すべての器具および消耗品を滅菌し、無菌条件下、理想的にはクラス II バイオセーフティキャビネット内で操作すること。
Procedure
A微生物懸濁液の調製約 15 分
- 対象微生物（例：Akkermansia muciniphila）を適切な培地で対数増殖期まで培養する。
- 培養液を遠心分離して細胞を沈降させ、上清を除去する。
- 細胞ペレットを適切な培養培地で再懸濁する。
- 600 nm における光学密度を測定し、必要に応じて細胞濃度を調整する。
BGut³Beads の添加約 5 分
- 付属のスプーンを用いてフラスコからビーズを取り出す。
- 水和状態の体積で、培養全体の 10% に相当する量のビーズを添加する。
- 実験デザインに応じて、37 °C で好気または嫌気条件下、最大 72 時間培養する。
Note ビーズは 0.9%（w/v）NaCl 溶液に浸漬した状態で供給される。保存する場合はこの溶液を残すこと。
Tip ビーズを一度シャーレに移すと、添加量を調節しやすい。
Cビーズの溶解1 試料あたり約 3 分
- 各試料に Bac³Gel 溶解培地（200 mM クエン酸ナトリウム）を体積比 1:1 で加える。
- ビーズが完全に溶解するまで十分に混合する。均質化した試料は下流解析に使用できる。
Volumes for every plate format
Downstream analysis
シーケンシング
14,000 × g で 5 分間遠心分離し、ペレットを用いて DNA を抽出する。
メタボロミクス
14,000 × g で 10 分間遠心分離し、上清を回収して凍結乾燥する。
代謝活性または光学密度
14,000 × g で 5 分間遠心分離し、上清を除去して 0.9%（w/v）NaCl に再懸濁する。
その他の解析
細胞生存率の評価、フローサイトメトリー、標準的な微生物学的特性評価にも適している。
Troubleshooting
本製品は研究開発目的（R&D）のみに使用してください。
Questions about this protocol
contact@bac3gel.com