Cystic Fibrosis Lung³Gel（嚢胞性線維症）

A微生物懸濁液の調製約 15 分

1. 対象微生物（例：Pseudomonas aeruginosa）を適切な培地で対数増殖期まで培養する。
2. 培養液を遠心分離して細胞を沈降させ、上清を除去する。
3. 細胞ペレットを適切な培養培地で再懸濁する。
4. 600 nm における光学密度を測定し、必要に応じて細胞濃度を調整する。

Critical ゲルが培養培地中で製造されている場合は、細胞ペレットを培地ではなく 0.9%（w/v）NaCl 溶液で再懸濁すること。

BCystic Fibrosis Lung³Gel での培養1 プレートあたり約 5 分

1. プレートを室温に戻す。本プロトコルでは 24 ウェルプレートを例として使用する。
2. 各ウェルに微生物懸濁液をゲルと体積比 1:1 で加える。24 ウェルプレートでは 1 ウェルあたり 700 µL。他のフォーマットは下表を参照。
3. プレートに蓋をし、37 °C で好気または嫌気条件下、最大 72 時間培養する。

Note 分子（プロバイオティクスや活性成分など）の影響を評価する場合は、添加前にゲル内で 37 °C、24 時間培養して安定化させる。

Tip 培養前にプレートを通気性シール膜で覆うと、交差汚染を防げる。

Critical 懸濁液はゲルの上面に優しく加えること。混ぜないこと。培養前の嫌気条件は必須ではないが、絶対嫌気性菌の損失を防ぐことができる。

Cゲルの溶解1 ウェルあたり約 3 分

1. ゲルを乱さないように上清を優しく吸引して除去する。24 ウェルプレートでは 0.9% NaCl 溶液 700 µL でゲルを洗浄し、上清を吸引して廃棄する。
2. Bac³Gel 溶解培地（200 mM クエン酸ナトリウム）をゲルと体積比 1:1 で加え、ゲルが完全に溶解するまで混合する。均質化した試料をマイクロチューブに移す。

Note 洗浄により、ゲルに定着した微生物のみを評価対象とすることができる。